考纲细化
1.基因工程的原理及技术（含PCR技术）（Ⅱ）
(1)概述基因工程的基本操作程序（4步）
电子教材串联导思易混易错1.目的基因的插入位点不是随意的
基因表达需要启动子与终止子的调控,目的基因应插入启动子与终止子之间的部位。
2.基因表达载体中,启动子≠起始密码子,终止子≠终止密码子
启动子和终止子位于DNA分子上,其作用和转录有关,起始密码子和终止密码子位于RNA上,其作用与翻译有关。
3.受体细胞获得目的基因并不意味着基因工程的成功
基因工程是否成功表现在目的基因是否成功表达。
方法技巧1.限制酶的选择方法
(1)应选择切点位于目的基因两端的限制酶,如图甲可选择PstⅠ。不能选择切点位于目的基因内部的限制酶,如图甲不能选择SmaⅠ。
(2)切割质粒时,一般所选限制酶要与切割目的基因的限制酶一致,以确保具有相同的黏性末端。质粒作为载体必须具备标记基因、启动子和终止子等,所以所选择的限制酶尽量不要破坏这些结构,如图乙中限制酶SmaⅠ会破坏标记基因,且切割位点应位于启动子和终止子之间以利于目的基因的插入和表达;如果所选限制酶的切点不是一个,则切割重组后可能丢失某些片段,若丢失的片段含复制原点区,则切割重组后的片段进入受体细胞后不能自主复制。
(3)为避免目的基因和质粒的自身环化和随意连接,可使用两种不同的限制酶切割目的基因和质粒,如图甲可选择用PstⅠ和EcoRⅠ两种限制酶(但要确保质粒上也有这两种限制酶的切点)。
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