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刺五加Eleutherococcussenticosus(Ruper.etMaxim.)Maxim.是我国的珍贵药用植物，具有增强免疫力、抗衰老等多种生物活性，三萜皂苷是其主要活性成分之一[1]。而在三萜皂苷的生物合成途径[2]中，需要法尼基焦磷酸合酶（farnesyldiphosphatesynthase，FPS）、鲨烯合酶（squalenesynthase，SS）和鲨烯环氧酶（squaleneepoxidase，SE）等多种关键酶的催化作用。
CpG岛（CpGIslands）是一段富含CpG二核苷酸且GC量高的DNA序列[3]，主要存在于基因上游的调控区域。在高等生物中，CpG二核苷酸序列中的胞嘧啶通常是呈甲基化状态，尤其是启动子区域中的CpG岛[4]。启动子甲基化可抑制转录因子与启动子的结合，从而降低转录水平或停止转录[5]。
本课题组前期已克隆得到刺五加的FPS[6]、SS[7]、SE基因的启动子序列，在此使用在线生物软件预测其的CpG岛分布情况，并进一步使用pCAMBIA质粒作为表达载体，GUS作为报告基因构建载体，转导根癌农杆菌转化拟南芥进行功能验证。为深入探明这3个关键酶对刺五加三萜皂苷合成的调控机制奠定基础。
1材料与方法
1.1材料
大肠杆菌Top10感受态细胞和pCAMBIA质粒购自天根生化科技（北京）有限公司，根癌农杆菌、T4DNA连接酶、PstI酶、NcoI酶、DLMarker等均购自TaKaRa宝生物工程（大连）有限公司，其他生化试剂为国产或进口分析纯。拟南芥Arabidopsisthaliana(L.)Heynh.由华北理工大学邢朝斌教授鉴定。
1.2启动子CpG岛的预测
利用EMBOSS（
