导读在上一篇文章中，我们已经了解到，基因编辑小鼠主要分为基因敲除（KO）、条件性敲除（CKO）及基因敲入（KI）等几种方式。其中基因敲除鼠（KO）是基因编辑鼠中最常用、也是最容易构建的模型鼠，但是这样一种模型鼠的设计和构建过程依然复杂。本文就以CRISPR/Cas9技术为例，为大家科普一下基因敲除鼠的设计、构建、鉴定与使用方法。
基因敲除原理
早期基因敲除主要利用DNA的同源重组原理，通过ES细胞打靶技术，设计同源片段代替靶片段。而近期热门的CRISPR/Cas9技术，通过人工优化的具有定位作用的单链引导RNA(singleGuideRNA，sgRNA)引导核酸酶Cas9蛋白在与sgRNA配对的靶位点处剪切双链DNA，引起DNA双链断裂（DSB），进而利用生物体内非同源末端修复机制（NHEJ）或同源重组机制（HR）修复DNA，导致基因移码突变、替换或删除，致使基因功能丧失。这样的小鼠其全身所有的组织和细胞中都不表达该基因产物，并能稳定遗传。
图1.基于CRISPR/Cas9技术的基因敲除原理
下面就为大家介绍一下基于CRISPR/Cas9技术基因敲除鼠的构建。
基于CRISPR/Cas9技术基因敲除鼠的构建过程就如下图所示：
主要包括其中，gRNA设计和筛选，sgRNA表达载体构建，显微注射，胚胎移植，小鼠培育及繁殖及小鼠基因型鉴定等过程。详情白癜风发病的机制是什么白癜风反复发作怎么办
