第十七期CRISPR/Cas9基因靶向修饰技术学习班
年12月22-24日，周五-周日，21日报到
(理论与实验相结合)
参会学员免费获得一份CRISPR/Cas9三合一对照质粒
授课讲师寄语：
CRISPR/Cas9基因靶向修饰技术学习班在国内已经连续主办了十六期，由于课程是本人自主设计和编排，信息量大、专业性强、操作性强，深受广大学员好评，当然深受欢迎的同时也吸引了其他同行的模仿和抄袭，这也是对我本人的一种肯定和鼓舞，激励着我去不断调整和优化课程内容。我们每期授课的内容都在不断的更新，以传授CRISPR/Cas9基因靶向修饰最新技术。本班的特点是每位学员必须动手实验操作，空洞的理论效果很差。过去的学习班为了让每位学员都能动手实验操作，不得不控制人数。
经讨论决定年12月底继续举办第十七期CRISPR/Cas9基因靶向修饰技术学习班，欢迎新老学员前来参加，我们共同探讨，共同学习。
南京大学模式动物研究所教授：赵庆顺
本期课程安排：
第一天上午9:00-12:00
第一讲、基因组靶向修饰技术简介
1、基因组靶向修饰技术发展简史
2、基因组编辑技术的工作原理
3、第一代基因组编辑技术ZFN
4、第二代基因组编辑技术TALEN
5、第三代基因组编辑技术CRISPR/Cas9
第二讲、CRISPR的设计
1、CRISPR设计的依据及原则
2、常用CRISPR设计软件简介
3、CRISPR的在线设计演练
4、靶向编辑基因的基因型确认（目标基因扩增引物设计策略）及CRISPR的再设计
第一天下午13:00-17:00
第三讲、CRISPR/Cas9基因组编辑工具的制备及向细胞内的递送策略
1、DNA形式的基因组编辑工具的制备与递送
2、RNA形式的基因组编辑工具制备及递送
3、RNP形式的基因编辑工具的制备与递送
实验一：CRISPR/Cas9基因组编辑工具All-in-One表达质粒的构建（1）CRISPR模板的制备
第四讲、sgRNA活性验证
1、体外法
2、体内法
2.1插入缺失（Indel）突变检测的基本策略
2.2基于胚胎反应器的活性验证方法2.3基于细胞系的活性验证方法
实验二：CRISPR/Cas9基因组编辑工具All-in-One表达质粒的构建（2）
CRISPR模板与线性化All-in-One载体的重组、转化、携带基因组编辑工具的转化子的培养
实验三：sgRNA活性体外验证（1）酶切反应的建立
第二天上午9:00-12:00
第五讲、利用CRISPR技术创建基因组编辑细胞系
1、基因敲入（如点突变和报告基因等）的供体设计原则及实例分析
2、基因组编辑工具导入细胞系的方法（转染与转导）
3、基因组编辑细胞系的筛选及基因型的快速确认4、敲入和/或敲除基因的功能确认策略
实验四：CRISPR/Cas9基因组编辑工具All-in-One表达质粒的构建（3）阳性转化子的快速验证法（PCR法）
实验五：基因组编辑突变体子的基因型鉴定（1）基因组DNA模板的快速制备、目标基因组DNA片段的PCR扩增
第二天下午13:00-17:00
第六讲、利用CRISPR技术创建基因敲除或敲入动物突变体
1、RNA或RNP基因组编辑工具（和供体）递送至受精卵
2、初建者（F0）体细胞携带靶向突变等位基因的确认
3、基因组编辑突变体（F1）的筛选
4、建系（F2）
5、基因敲除/敲入的功能确认策略
第七讲、利用CRISPR技术创建基因敲除或敲入植物、真菌和细菌突变体
1、基因组编辑工具的制作
2、基因组编辑工具的递送
3、基因组编辑突变体（F1）的的筛选
4、建系（F2）
5、基因敲除/敲入的功能确认
实验六：CRISPR/Cas9基因组编辑工具All-in-One表达质粒的构建（3）电泳确认
实验七：sgRNA活性体外验证（2）电泳观测sgRNA活性实验结果
实验八：基因组编辑子等位基因的基因型鉴定（2）电泳识别基因组编辑突变体
第三天上午9:00-12:00（12:00以后课程结束）
第八讲、基因组编辑技术的脱靶问题
1、脱靶的产生原因
2、脱靶检测
3、解决脱靶问题的方法
4、脱靶问题对不同领域研究者的意义
第九讲、利用CRISPRi或CRISPRa技术调控基因在细胞中的表达
1、dCas9的特征简介
2、运用CRISPR技术调控基因在细胞中表达的基本实验过程
3、CRISPR技术的转录抑制
4、CRISPR技术的转录活化
5、碱基编辑技术简介
第十讲、CRISPR技术的伦理学问题
1、新型基因组编辑技术的发展
2、基因组编辑技术的应用
3、基因组编辑技术的伦理学问题
上海玮瑜生物科技有限公司
上海服淡信息科技有限公司
年12月22-24日，南京市浦口南京工业大学绿色建筑产业科技园
为了便于接送、统一指定南京新逸天金丝利酒店，住宿自理
标准间（含早）元/人，合住元/人，南京浦口高新区丽景路8号
元/人(不含住宿费)，授课期间发放纸质邀请函（盖章）按交费先后顺序确定名额及座位，注册费包含教材、午餐等费用。
1，转账或支付宝：
A：银行转账
账户名称：上海服淡信息科技有限公司
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B：支付宝转账
收款人：wybiot
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