之前小编给大家介绍了蛋白组学的实力担当——DIA，今天给大家带来一个能将你脱离WB(WesternBlot,免疫印迹实验)苦海的干货——PRM靶向蛋白组学，助力你的蛋白实验。
PRM原理
PRM是一种基于高分辨、高精度质谱的离子监视技术，能够对目标蛋白质、目标肽段（如发生翻译后修饰的肽段）进行选择性检测，从而实现对目标蛋白质/肽段的定量。首先利用四级杆质量分析器的选择检测能力，在一级质谱中（Q1）选择性地检测目标肽段的母离子信息；随后在collisioncell中对母离子进行碎裂；最后利用高分辨、高质量精度分析器在二级质谱中检测所选择的母离子窗口内的所有碎片的信息。这样即可对复杂样本中的目标蛋白质/肽段进行准确地特异性分析。
PRM适用情况
◆定量蛋白质组学后，目标蛋白需要验证
◆要做WB，却没有合适的抗体
◆需同时定量多个蛋白质
◆功能验证中涉及到蛋白质定量
PRM技术路线
PRM技术优势
◆无需抗体，获取更加准确和重现的蛋白定量结果
◆PRM与MRM相比，高分辨扫描，选择性高，有效排除复杂基质干扰
◆无需优化碰撞能量，无需指定子离子，方法开发简单
◆谱图可以直接搜索数据库，进行定性和定量。
PRM案例分享
DIA联合PRM靶向定量蛋白组鉴定GBM中的血液生物标志物[1]
◆研究背景
胶质母细胞瘤（GBM）是最恶性的（WHOIV级）和最常见的脑肿瘤。近90％的GBM在没有异柠檬酸脱氢酶（IDH）突变的情况下从头快速发展，没有临床或组织学证据表明恶性前体病变较少。需要血液中的分子生物标志物来帮助胶质母细胞瘤（GBM）的早期诊断和临床评估。
◆研究目的
为了研究生物标志物候选物与GBM生物学之间的关系并鉴定GBM患者的血浆生物标志物候选物。
◆研究方法
使用SWATH（或者DIA）质谱分析对GBM患者（n=14）和健康对照（n=15）的血浆蛋白质组进行定量比较，同时通过定量靶向蛋白质组学分析验证结果。
◆研究结果
本研究确定了8种GBM生物标志物候选物（富含亮氨酸的α-2-糖蛋白（LRG1），补体成分C9（C9），C-反应蛋白（CRP），α-1-抗胰凝乳蛋白酶（SERPINA3），载脂蛋白B-（APOB），凝溶胶蛋白（GSN），Igα-1链C区（IGHA1）和载脂蛋白A-IV（APOA4））。其中，LRG1，C9，CRP，GSN，IGHA1和APOA4给出了ROC曲线下面积大于0.80的值。LRG1，CRP和C9的血浆浓度显示与肿瘤大小显著正相关（分别为R2=0.,0.和0.）。
表1通过靶向蛋白质组学分析验证血浆中差异表达的蛋白质的总结
参考文献：
[1]MiyauchiE,FurutaT,OhtsukiS,etal.IdentificationofbloodbiomarkersinglioblastomabySWATHmassspectrometryandquantitativetargetedabsoluteproteomics.[J].PlosOne,,13(3):e.
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编辑
王小纪
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