GenomeEditingSystematicquantificationofHDRandNHEJrevealseffectsoflocus,nuclease,andcelltypeongenome-editing.——YuichiroMiyaoka,JenniferR.Berman,etal.ScientificReports.MarchddPCR原理HDR：强于WT组的FAM信号+与WT组相近的HEX信号NHEJ：与WT组相近的FAM信号+弱于WT组的HEX信号gRNA及ssODN设计HEKT中RBM20基因单/双切刻酶系统引起的基因编辑结果中，除Cas9D10A+F1+R1组外，HDR的频率均高于NHEJ，而WTCas9及TALEN给出了相反的趋势。HEKT中GRN及ATP7B基因GRN：WTCas9引起了显著高于其他组的NHEJ频率ATP7B：切刻酶组NHEJ频率高于HDR小结：在HEKT细胞中，单/双切刻酶系统产生的HDR频率普遍高于NHEJ，但此过程在不同基因座或相同基因座的不同位置会表现出差异。Hela中RBM20基因在Hela细胞中，所有组别均表现为NHEJ频率高于HDR，HDR频率极低iPSC中RBM20基因转染方法对基因编辑频率的影响对于HEKT细胞，脂质体转染与电穿孔转染所获得的基因编辑频率没有显著差异。结论1.完全相同的基因编辑系统在不同细胞类型中会得到有差异的结果，这可能与不同细胞对DNA修复组件蛋白的表达差异、表观遗传学差异等相关2.在同一种类细胞中，同一类核酸酶对不同基因或相同基因的不同靶点，会得到有差异的结果3.在基因编辑过程中，HDR与NHEJ的发生频率没有关联实验材料?WTCas9：pX?Cas9D10A：pX?FokI-dCas9：pXFokI-dCas9?FokI-dCas9gRNA设计：消除白癜风中科医院专家
