一、条件性敲除小鼠（Conditionalknockoutmice,CKO）原理
条件性基因敲除小鼠：使靶基因缺失仅发生于小鼠生命周期的某一阶段或某一特定的组织，而在其它组织或细胞表达正常，从而使对小鼠基因组的修饰的范围和时间处于一种可控状态。如下为全敲和条件性敲除的对比：
1.技术原理
通过染色体位点特异性重组酶系统Cre-LoxP或Flp-FRT来实现的。在待敲除目的基因一个或多个重要外显子两端各放置一个LoxP（或FRT）序列，得到flox（FlankedbyLoxP)小鼠。将flox小鼠与带有组织特异性表达的Cre(或Flp)的小鼠交配繁殖，以获得在特定组织里把目标基因敲除掉的小鼠，即条件性基因敲除小鼠。
鉴于这2种技术基本原理一致，Cre-LoxP系统更多用于动物体内编辑，下面就以Cre-LoxP具体介绍。
2.Cre/LoxP系统组成
Cre-LoxP系统源于P1噬菌体，可以介导位点特异的DNA重组。该系统含有两种成分：
LoxP位点：一段长34bp的DNA序列，为重组酶识别的位点：含有两个13bp的反向重复序列和一个8bp的核心序列。
Cre重组酶：为一种酶，由个氨基酸组成的单体蛋白；具有位点特异性，可使LoxP片段间的基因序列被删除或重组。
根据LoxP位点方向分以下三类重组方式：
⑴两个LoxP位点方向相同：如果两个LoxP位点位于一条DNA链上，且方向相同，Cre重组酶能有效切除两个LoxP位点间的序列；如图下①所示。
⑵两LoxP位点方向相反：如果两个LoxP位点位于一条DNA链上，但方向相反，Cre重组酶能导致两个LoxP位点间的序列倒位；如图下②所示。
⑶两个LoxP位点分别位于两条不同的DNA链或染色体：Cre酶能介导两条DNA链的交换或染色体易位。如图下③所示。
图1.Cre介导的LoxP片段三种重组方式示意图
在这三种重组方式中，第一种敲除模式最为常用。
3.重要角色之Cre重组酶
条件性基因敲除鼠主要分为：可控的空间或时间敲除基因，实现这一过程主要源于对Cre重组酶的操控。下面介绍基于这2种目的对Cre酶的操控。
控制基因敲除的空间范围（组织特异性）：通过将Cre重组酶基因插入在特定启动子之后，由于启动子表达的空间特异性，启动子带动Cre酶的转录后，实现空间特异性的基因敲除。例如，将Cre基因置于星形胶质细胞特有的启动子GFAP之后，再与LoxP鼠杂交，可以获得仅在星形胶质细胞敲除特定基因的鼠。
控制基因敲除的时间范围：现在多使用的是rtTA-tetO系统，即将Cre酶置于tetO启动子之后，rtTA转录因子与tetO启动子的结合则需要强力霉素（DOX）的支持，通过给予DOX，使rtTA结合tetO进而产生Cre酶，切割LoxP片段，敲除基因。即通过控制给予强力霉素的时间，就可以控制基因敲除的时间。结构如下图：
图2.rtTA-tetO系统示意图
二、条件性敲除鼠的设计与构建
1.首先需要构建这2种鼠：特定基因两端带有LoxP鼠和细胞特异性表达的Cre鼠。
LoxP鼠：通过基因编辑技术将目的片段敲除，再通过基因敲入的方式，将带有LoxP片段的目的基因整合入原基因组，就能得到想要的LoxP鼠。
图3.LoxP鼠构建策略图
Cre鼠：通过基因敲入的方式构建，将Cre基因插入特定启动子之后即可得到。Cre作为一种工具鼠，目前市场上有很多现成的，可以直接购买获得。
随后，将Cre鼠与LoxP鼠交配得到同时带有Cre与LoxP基因的鼠，即为条件性敲除鼠。
