基因工程习题详解p61p64

(1)1,2过程为基因工程的酶切过程,需要的工具酶为限制酶(限制性核酸内切酶),连成C的话需要DNA连接酶

(2)AB均是双链的DNA分子,因此DNA的基本结构单位是脱氧核苷酸,B

(3)图中C为双链的闭环状DNA分子,但是已经经过了重组,故C为重组DNA分子或重组质粒。

(1),首先获得gene,然后连成重组质粒,然后转入受体细胞,最后筛选出来

(2)工具酶为限制酶和DNA连接酶,故③④

(3)大肠杆菌运载体常用的是质粒

(4)消费者具有知情权

1:剪刀为限制酶,针线为:DNA连接酶,载体为:质粒;故答案为D

2:D,质粒至少有一个复制原点,多个酶切位点,至少一个筛选标记基因。因此ABC均是质粒的特征。虽然质粒的定义为环状的,但是作为运载体可以是线性存在,然后重组成环状,故在基因工程中质粒可以不是环形。重组质粒必须是环形。

3:首先粘性末端相同才有可能是同一种酶切割,24明显相同,13一个是AGCT,一个是ACCT。故正确答案应该选C,鉴于讲义打印是C和G不容易区分,对于选B的同学我也认为判对了。

4.A,转基因动物的受体细胞均是受精卵(包括乳腺生物反应器受体细胞也是受精卵),采用的技术为显微注射

5.C,A人工合成基因是先合成一条链然后通过碱基互补配对形成双链的gene,B目的基因与运载体结合-粘性末端之间首先碱基互补配对结合,然后在DNA连接酶的催化下形成磷酸二酯键,D目的基因的检查和表达均涉及中心法则,而中心法则的所有步骤均存在碱基互补配对。重组载体直接导入受体细胞中仅涉及到物质的运输,不涉及DNA的变化所以C没有碱基互补配对。

6.D,EcoRI切割DNA分子为bp,AD符合题意,KpnI切割形成两条链和,则A应该是和两个,故A错误。D正确。同时酶切,D可以形成两个,一个因此符合题意。

(1)SmaI的酶切位点为CCCIGGG,因此可以将该6个碱基对进行平均分开,形成平末端,其所切割位置如图红线所标,则最左边的片段为+3=bp,最右边同理为bp,中间则减去6bp为bp,故答案为bp,bp和bp

(2)生物体中的同源基因均是一个来自父亲一个来自母亲,故基因为Dd的生物体中会同时存在D为如图的基因,d为虚线框被T-A替换的基因。SmaI酶切D基因为形成三个片段长度为第一题的答案,而SmaI酶切d基因仅仅只能得到两个片段分别是左边的+-3=bp,右边的为bp。故该题答案有4种不同的DNA片段。

(3)首先排除SmaI,因为它能把目的基因破坏,分析基因两端GGATCC序列可知其能被BamHI和MboI两个酶切割。若选用MboI酶切虽然基因完好获得,但是质粒中的抗生素AB基因均被MboI被破坏,就无法起到筛选标记的功能。如果用BamHI切,目的基因完整获得,抗生素A基因被破坏,而抗生素B基因仍然可以起到筛选左右,因此选择BamHI。因为抗生素A基因在重组载体中已经被破坏了,所以培养基中应该添加抗生素B进行筛选。仔细阅读题干:含有重组质粒的大肠杆菌基因不表达,说明基因已经成功连入,只是没有表达。其原因为单酶切会造成基因反向连入质粒,序列倒置造成基因表达不成功。

1)首先注意观察AscI和BssHI的雷同,AscI中竟然含有BssHI的酶切位点,也就是说能被AscI识别切割的位点一定能被BssHI切割,反之则不一定,因此我们只需要选BssHI就可以获得目的基因,然而要构建重组质粒的话,你会发现没有BssHI的酶切位点,那应该怎么选呢?首先排除NotI因为它破坏了目的基因的完整性,通过观察pspOMI和MluI的识别序列你会惊喜的发现MluI形成的末端为NGCGC,和BssHI形成的末端NGCGC一样,N代表不同的碱基,因此根据碱基互补配对原则,MluI和BssHI的末端均可以连接。故可以用MluI切割质粒。然后与基因通过DNA连接酶进行连接,重组载体大小为0.8+2.5=3.3Kb。因为是两种不同的酶,虽然末端突出相同,但是旁边的碱基发生变化,所以MluI和BssHI两种酶的识别位点均有一个碱基发生改变,因为酶的识别具有专一性,一个位点都不能错,所以不能再被以上两种酶切割。

(2)通过显微注射技术,对象为受精卵。由题干可知该抗生素的名称为氨苄青霉素

(1)同种酶切连接的DNA识别序列没有发生变化,因此E酶切连接后还能被E酶切,同理F也可以。答案选A

(2)该质粒用G或H酶切只能得到一条链(即把环型切成线型),而表中我们得到用G或H切割重组质粒分别得到两条链,因此可以断定目的基因中含有G和H两个酶切位点。由表知重组质粒的总长为1.6+3.1=1.2+3.5=4.7K,而由题意知EF为0.2K,目的基因是通过替换EF而进入载体的,因此基因的长度为3.7-0.2+X=4.7,故X=1.2Kb。由题意知GE=0.8KFH=0.5K,而G能切出1.6K的片段,故目的基因中G的位置(从左往右)为1.6-0.8=0.8K,H的位置为(从右往左推)1.2-0.5=0.7K,因为该基因没有画完整仅仅画1.1k,因此可以从从左往右推5格,相当于右边占了0.7K,如图所示

(3)受精卵

(4)tRNA序列和mRNA互补,而mRNA又和模板链互补,因此tRNA和模板链一致,仅仅是U和T的区别,因此tRNA序列为UGA。一个核糖体有三个密码子位点,但是由于物理冲撞,仅仅有两个tRAN可同时容纳其中。

(5)翻译一定是由起始密码子开始的,但是转录的时候前面的调控区起始区和后面的终止区域也会被转录,起始密码子和终止密码子均在该区域中,因此答案为B。

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