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作为一种划时代的基因组编辑技术,CRISPR-Cas9技术一经问世,便风靡生物圈,其中最主要的原因就是它makeresearcheasy,再也不必像TALEN和ZFN技术那样进行复杂的分子设计,也不用担心像ZFN那样的低效率。自从有了CRISPR,从单细胞生物到多细胞生物,从植物到动物,万物皆可盘,从而大大加速了生物基础理论研究的进展,也为治愈一些无药可治的癌症和遗传病提供了可能性。
当前,CRISPR技术主要用于基因敲除,即灭活基因,使其失去功能,从而研究该基因表达的蛋白对于生物体的作用。同时,在特定的场合下,一些外源基因或DNA片段也需要插入到不同生物体的基因组中特定的位置,用于满足不同的生物基础研究,同时也是治愈一些遗传性疾病的技术手段。虽然CRISPR也能实现基因组定点插入或整合,但是敲入效率远远低于基因敲除的效率。因为基因敲入比基因敲除更加复杂,取决于一系列条件:比如宿主细胞类型,细胞状态,基因修复效率,DNA插入片段大小和基因组整合位点等。各个因素的综合影响,导致了基因敲入效率低下。
为了提升CRISPR敲入基因的效率,更好的实现makeresearcheasy,并达到临床治疗的要求,CRISPR研究者们不断探索新的方法,比如优化CRISPR编辑系统,改变细胞状态和提升基因组修复效率等。著名的华人学者张锋所在的研究团队另辟蹊径,在NIH的EugeneKoonin教授所在团队的研究基础上,与其合作,共同开发出了一种全新的基因敲入技术,在原核生物大肠杆菌中实现了基因整合效率高达80%,大大超乎想象。这一突破性进展被发表在Science在线杂志上。