什么原因导致白癜风 https://m-mip.39.net/news/mipso_5920693.html师妹「我们本次实验做基因敲除的转基因小鼠吗？」师弟「不是做基因点突变的转基因小鼠实验吗？」师兄「哈哈，你们踩了我踩过的坑！你们这两个的描述都存在问题！」我们大多习惯把所有的基因编辑小鼠都称为「转基因小鼠」，其实细品下便知这是一种错误的说法。来来来，师兄帮你们科普下！01PART
基因编辑小鼠的分类
基因编辑小鼠可分为三大类、7小类：（1）转基因（Tg）首先构建表达载体，包含启动子、增强子、编码区、polyA等元件，然后将表达载体注入到受精卵的细胞核内，外源表达载体将插入到受精卵的基因组内，再将该受精卵移植到受体母鼠输卵管内，发育成为小鼠个体，该小鼠就会表达转入的外源基因。（2）基因全身性敲除（KO）利用Crispr/Cas9系统，在受精卵的目标基因的编码区两侧分别切断，然后受精卵在连接断口的过程中，会丢失掉断口之间的序列（即编码区）。该受精卵移植到受体母鼠输卵管内，发育成为小鼠个体，该小鼠将无法表达目标基因，导致目标基因将完全失去活性，表现为全身性基因敲除。（3）基因敲入（KI）首先构建打靶载体：包含同源臂和外源基因，然后将表达载体通过显微注射的方法注入到受精卵的细胞核内，同时利用Crispr/Cas9系统，在受精卵目的基因位置切断基因组DNA，受精卵会通过同源重组将外源基因定点整合到基因组内。该受精卵移植到受体母鼠输卵管内，发育成为小鼠个体，该小鼠就携带了转入的外源基因。02PART基因修饰类型选择
小鼠基因修饰类型有很多种，那么如何选择最适合自己研究内容的基因编辑小鼠呢？我们希望得到与普通（野生）小鼠不一样的小鼠，其实只有3种的情况：「多」，比普通（野生）小鼠多某种功能；
「少」，比普通（野生）小鼠少某种功能；
「换」，比普通（野生）小鼠改变了某种功能。
下面是常见的7种制备目的，红线连接着首选的修饰类型：关于「随机转基因」和「定点转基因」，二者的特点：随机转基因：外源基因插入的位置、方向、拷贝数都是随机的。
定点转基因：可以将外源基因插入到基因组的特点位置，方向、拷贝数都可以预先确定。
二者的区别：下面的表格中进行了简单的对比。为了研究某个基因在体内的功能，通常需要将该基因敲除，再观察其出现了什么异常现象，就可以推测该基因具有何种功能。如下图所示：关于「全身性基因敲除」和「条件性基因敲除」，二者在成本、制作周期、建系难度上，都有着不小的差别，那该如何选择呢？尽可能优先选择全身性基因敲除，但必须同时满足以下要求：敲除该基因，不影响小鼠存活；
敲除该基因，不影响小鼠发育；
敲除该基因，不影响小鼠繁殖性能。
如果不满足上述的任何一点要求，就不能选择全身性敲除了。需要该基因缺失后的表型，怎么办？此时可以选择条件性敲除，通过实验设计，可以在小鼠的某个年龄、或某个器官/组织内进行基因敲除。这样，就可以对活着的小鼠进行科学研究了。条件性敲除小鼠是近几年来非常热门的修饰类型，围绕条件性敲除小鼠可以开展很多高水平的动物实验研究。通过合理的实验设计，一种条件性敲除小鼠可以反复使用，在不同器官、不同组织、或不同年龄进行基因敲除的研究。关于「基因人源化小鼠的修饰类型」该如何选择呢？基因人源化小鼠，就是让小鼠表达人的基因。根据实验要求，可以选择不同的修饰类型。如何选择人源化小鼠的修饰类型，参见下表：03PART基因编辑小鼠的制作步骤
和流程
制作基因编辑小鼠，实际上是对受精卵进行基因编辑，然后将编辑后的受精卵培育成小鼠个体，作为首建鼠（founder鼠），这只首建鼠全身的细胞都源于受精卵的分裂和复制，所以其全身所有细胞的基因组与编辑后的受精卵完全相同。最后将首建鼠扩繁建系，获得大量的小鼠用于动物实验。制备基因编辑小鼠分为6个步骤：①制备基因编辑分子工具（cas9、打靶载体donor等）②对雌鼠超数排卵，再与雄鼠交配获得大量受精卵③将基因编辑工具显微注射到受精卵内④将注射后的受精卵移植给受体母鼠⑤仔鼠出生及鉴定筛选⑥阳性首建鼠扩繁建系整个过程的流程图：04PART基因编辑小鼠每个制作步骤
的周期
①制备基因编辑工具：一般1~2个月②受精卵准备：日常提供，不需额外时间③显微注射：一般1~2个月④胚胎移植：显微注射后当天完成⑤仔鼠出生：胚胎移植后3周；基因型鉴定：出生后2~3周⑥首建鼠扩繁：扩繁一代需要3个月根据经验，各种类型基因编辑小鼠获得首建鼠（F0代）的平均周期为：Tg——3~5个月
KO——2~3个月
KI——3~5个月
CKO——3~5个月
点突变——2~4个月
以上是获得首建鼠的时间，但扩繁一代建议由专业机构来操作，高效而安全的交付F1代。接收F1代表面上既多花钱还晚交付，那有什么好处呢？
动物模型专家维通达给出TIPs:
一般情况下，建议不要着急接收首建鼠，而是由专业机构、企业扩繁一代，获得F1代小鼠再交付。原因主要有：
①安全性更高：首建鼠一般数量较少，没有备份，万一运输过程中出现意外，将造成品系丢失；或者同学自己扩繁的时候，遇到意外情况，也可能造成品系丢失。②效率更高更快：首建鼠繁殖性能可能相对较差，同学自己扩繁比较慢，或者有可能扩繁失败。③直接快速：首建鼠有可能是嵌合体，将造成其后代的基因型比较复杂，需要再次鉴定筛选出有用的个体。05PART一只基因编辑小鼠多少钱？
基因编辑小鼠属于私人订制，通常使用者只有客户自己，所以基因编辑小鼠不是按「只」卖的，而是按照项目订制收费的，制作的小鼠的产权归客户所有。一般交付的小鼠不少于3只，同学收到小鼠可以自己无限扩繁。具体费用取决于制作类型，请与维通达沟通。您需要提供什么？通常您只需要提供基因的名称，以及如何编辑的想法。然后维通达会把您的想法落实为具体方案，达到您的目的。之后，签订服务合同后，您就等着接收小鼠吧。现在不开学，不能到校，小鼠无法扩繁，怎么办？
维通达了解到，好多院校、研究所受疫情影响无法开学，而小鼠的繁殖性能通常在6~8月龄以内最好，过了这个阶段，繁殖力将迅速下降，甚至有绝育的危险。
针对这种困难，维通达已做好准备，为广大同学们提供大小鼠代养扩繁服务，包含净化、饲养、观察、合笼、离乳、IVF快速扩繁、小鼠编号及单基因型鉴定等，综合优惠价每只后代元起，只要子代小鼠满99只即可享受该优惠。提供2只可育雄鼠，最快3~6个月即可获得几十只阳性后代。
等开学了，直接做动物实验，美哉~~
文章来源：维通达
题图来源：站酷海洛
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