在日常生活中，经常会有遇到这种情况，在文献查阅或者数据库筛选的情况下发现某基因在疾病与正常情况下存在表达明显的差异。那么，如果希望对于这个基因究竟在疾病中发挥什么功能进行探究，到底怎么做才好呢？师兄师姐们可能会说，很简单，在细胞株中进行转染一个质粒或者慢病毒就好啦。那么，到底需要我们如何做呢？
过表达细胞中基因的表达，主要是由转录因子结合在启动子、增强子等原件上，然后启动转录进而翻译形成蛋白质的过程。人为地进行过表达，其实就是对于启动子进行操作的过程。
通常的做法，是将基因全长扩增出来，连在一个比较强的启动子后边。在载体构建中，常见的启动子是CMV，EF1a等等。这些启动子都是已经构建在载体质粒中了，不需要我们进一步进行载体构建了，我们在选择空载载体的同时就已经选好了启动子。下一步我们只需要针对需要过表达的序列进行引物设计，PCR，进而进行跑胶，回收，酶切，连入目的载体就大功告成啦。
有同学可能会问，如果设计引物以后怎么调节PCR反应条件都没有目的条带怎么办。有一个省事的办法，就是可以去看看各大生物公司有没有现成的cDNA文库里面有没有自己想要的目的基因。如果有，直接买回来构建到自己想要的载体上面就好。如果没有，终极办法就是化学合成了。这个是交给生物公司做，并且按照碱基数收费的。大概1.8-2.5/碱基的合成费用，周期大概10个工作日即可。
敲低目前对于基因的敲低，主要通过RNAi实现的。RNAi干扰的机制在于小干扰RNA（siRNA）可以结合mRNA，形成的双链RNA会被降解为小片段进而丧失表达功能。对于基因的siRNA设计有很多网站（请复制网址至浏览器中打开），比如
