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近期发现一个有趣的现象，很多老师秉承着一个观念，就是敲除实验里的细胞没必要做到单克隆，只要蛋白水平有敲低效果就可以完成实验。
听起来这的确是个省时省力的好方法，但是细细琢磨下来又似乎存在着一些弊端。要知道，这个方法的可行性建立在%确保最终细胞会有敲低效果的基础上，只是结果会呈现出或多或少的差异。而实际上，这一太过理想化的构思却会面临诸多现实问题，下面将用实验数据为您一一分析。
就算是同株来源，我和你也不一样
F老师想用一株自有细胞系做敲除株，最终鉴定敲除株目的蛋白的敲低效果。考虑到细胞可能存在异质化，在进行敲除实验之前我们对该野生型细胞株先进行了单克隆化处理，并随机筛选了10株单克隆进行RT-qPCR验证。结果表明，不同单克隆的目的基因其表达水平相差很大，最高的表达效率是原始细胞株的近10倍，而最低的则是原始株的3.50%，两者之间的表达效率相差将近倍。目的基因溶解曲线
“死灰复燃”的蛋白表达
M老师与F老师有着大致相同的敲除实验方案和实验诉求，不同的是，M老师并没有打算做到单克隆这一步。转染药筛细胞后，他用野生型与Mixclone进行了RT-qPCR验证，结果显示有明显的表达量降低。
M老师认为，该结果也可以在WesternBlot中完美呈现，但事与愿违，几乎没有任何敲低效果。经建议M老师同意进一步单克隆化，经过筛选，最终获得了一株敲低效果显著的单克隆敲除株。
“稳定+高效”才是鱼和熊掌兼可得
读到此处的你或许会说，我当然也知道单克隆细胞株的优势，也希望能一次性获得好几株单克隆细胞株，让我筛选效果最佳的。
可是单克隆化的过程总是会遇到诸多困难，就只能放弃了，听别人说单克隆化没必要，只要细胞株在蛋白水平有敲低效果就行，我也照着做好了。然而大量的实验数据证明，不如意的结果，往往可能就是因为这一点“没必要”造成的。
高效的实现单克隆化
传统的单克隆化方法，主要有极限稀释法和克隆环法：
极限稀释法是通过细胞计数将细胞稀释至极限，以单个细胞的方式接种至96孔板中培养获得克隆的方式；然而这种方法培养周期长，会消耗大量耗材和试剂成本，结果往往也不尽如人意，如获得的克隆样本数不多，边缘效应导致细胞死亡等。
克隆环法是将数以百计的细胞接种于培养器皿中培养2周，单个细胞会在局域增殖形成克隆集落，使用克隆环对集落进行标定，消化并接种至96孔板中。这种方式培养周期也较长，并且要求实验人员有很强的无菌操作技能。
ClonePlus?技术
我们从传统方法中不断吸取经验摒弃不足，Cas9X海星生物技术平台研发出了ClonePlus?技术。该技术是专有高效的细胞敲除技术，主要通过高通量电转系统和高通量的克隆分选技术结合，获得基因编辑的单细胞，其克隆形成率可以达98%，就算是克隆形成率低的细胞株也能获得敲除单克隆，7-10天可以完成绝大部分的细胞的单克隆工作。基因组稳定的单克隆化细胞株，通过筛选获得的高效表达，“稳定+高效”，鱼和熊掌兼可得。Cas9X技术团队致力于将实验中的每个细节都做到极致，力求精准而不是做无用功，让您的每分耕耘皆有收获。预览时标签不可点文章已于修改收录于话题#个上一篇下一篇