在CRISPR/Cas9之后,DNA指导的核酸内切酶NgAgo又登上基因组编辑的舞台。几个月来,NgAgo经历了大起大落,一开始备受瞩目,最近又备受质疑。英国医学研究理事会(MRC)再生医学中心的PooranDewari近日调查了NgAgo技术的使用情况。他认为,这种技术还需要更多时间的优化和发展,才能真正与CRISPR正面交锋。
NgAgo的独特之处
Dewari首先介绍了NgAgo为何引人注目。首先,与Cas9不同,NgAgo不需要PAM序列来识别目标,这让研究人员有了前所未有的自由,去靶定DNA中的任何序列。其次,NgAgo的特异性是由DNA指导序列决定的,而不是RNA向导。第三,它能够靶定困难的富含GC区域,这些区域似乎耐受Cas9的切割。
当然,CRISPR/Cas9和NgAgo基因组编辑方法都有自己的优点和缺点。NgAgoDNA向导比较便宜,可自行开展5’-磷酸化或从市场上购买。不过,与RNA向导不同,它不能从质粒中产生。此外,NgAgo/ssDNA的体外组装需要在55°C孵育,这个温度对哺乳动物细胞很危险。在体内,只有新生的NgAgo蛋白可以与ssDNA向导形成复合物。因此,研究人员必须将5’-P-ssDNA向导与NgAgo表达质粒共转染,才能在体内编辑基因。
NgAgo的真实体验
自今年5月首次发表以来,NgAgo技术一直备受治白癜风广州哪家医院好治白癜风乌鲁木齐哪家医院好