韩春雨NgAgo好消息，抑制基因功能被证实!
NgAgo寒冰期今解封！
11月11日，Nature旗下生命科学期刊CellReseach在线刊登了中国南通大学神经再生重点实验室副教授刘东团队关于NgAgo研究的最新成果——他们发现NgAgo系统确实有效！在这篇题为NgAgo-basedfabp11ageneknockdowncauseseyedevelopmentaldefectsinzebrafish的Lettertotheeditor中，研究者观察到，NgAgo确实可以改变斑马鱼的表型，但这并非是通过基因编辑实现的。事实上，团队通过实验得出结论，NgAgo系统可以在不改变目标基因序列的情况下，对基因表达实现knockdown（即下调其目标mRNA表达水平），且这可能与NgAgo的基因剪切活性没有关系。文章作者同时强调，他们没有在斑马鱼中观察到NgAgo系统的基因编辑功能。NgAgo抑制基因表达的实验步骤我们这里先简单介绍一下以上的几个结论是怎么做出来的。 首先，NgAgo可以改变斑马鱼的表型，但与基因编辑无关。1研究者选择了斑马鱼中名叫fabp11a的基因作为NgAgo的“调控”对象。该基因在参与调解葡萄糖和脂代谢稳态方面具有重要作用，但是在斑马鱼胚胎发育中该基因的功能未知。2.将使用NgAgo编码的mRNA和设计好的5’-磷酸化单链DNA一起注射到了单细胞时期的斑马鱼胚胎中。3.使用NgAgo编码后，30%的斑马鱼胚胎在发育后出现了眼部畸形。4.对NgAgo编码后Fabp11a基因测序，发现靶基因没有发生任何基因突变。说明眼部畸形不是基因突变的结果。5.过RT-PCR检测Fabp11a基因的表达，发现眼部畸形产生的原因是，Fabp11a基因表达有显著敲低。6.结论：NgAgo可以改变斑马鱼的表型，但与基因编辑无关。NgAgo的knockdown作用是具有普遍性的。但作者还未证实NgAgo有基因编辑功能。河北科技大学教授韩春雨此前在《自然-生物技术》上发表的文章显示，NgAgo系统可以在37°C的条件下对人细胞进行基因编辑，编辑效率为11.2%-41.3%。研究者在确保半数以上的实验斑马鱼胚胎能正常发育的条件下，将实验温度设定为37°C。然而结果显示，NgAgo系统在这一条件下仍没有表现出任何基因编辑活性——但存在明显的knockdown效应。摘要原文ArecentreportofgenomeeditingusingNatronobacteriumgregoryiArgonaute(NgAgo)withguideDNA(gDNA)inhumancellspromptedustoexploretheutilityofthisproteinforinvivogeneticmanipulationinzebrafish(Daniorerio).Zebrafishisamodelorganismthatoffersseveraldistinctadvantagesforstudyinggenetics,developmentalbiology,vascularbiologyanddiseasemodeling.Inthelastseveralyears,loss-of-functiongenomiceditingtechniques,includingzinc-fingernucleases(ZFNs),artificialtranscriptionactivator-likeeffectornucleases(TALENs)andclusteredregularlyinterspacedshortpalindromicrepeats(CRISPR)/CRISPR-associated(Cas)system(CRISPR/Cas9)havebeenadoptedforzebrafish.RecentlythegDNA/NgAgosystemhaselicitedmuchinterestbecauseofsomeuniqueadvantages:lowtolerancetoguide-targetmismatch,minimumoff-targeteffects,andeasytodesign.HereweinvestigatedwhetherthegDNA/NgAgosystemcouldbeusedtomanipulatezebrafishgenesinvivousingfabp11aasatestcase.结论原文Insummary,ourstudyshowsthatgeneknockdownisthemainmechanismbywhichgDNA/NgAgoaffectsgenefunctioninzebrafish.ThisissupportedbyresultsoftheexperimentsusingpresumablycatalyticallydeadNgAgo.Inaddition,wehavefailedtodetectanymutationinalltheembryosweexamined.Sincethecatalyticallyinactive(dead)Cas9(dCas9):sgRNA怎样才能治好白癜风什么医院能治疗白癜风