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作者：遥遥（转载请注：解螺旋·医生科研助手）
如果是在做动物实验，而且是基因敲除鼠的实验，那么就会做大批量的小鼠基因型鉴定试验，来确定自己小鼠的基因型，然而，再做实验的过程中往往会出现一些意想不到的结果，我作为一只实验狗在这里为大家提一点点小建议。
提取DNA
1、组织提取DNA剪下老鼠0.5-1.2cm尾巴或者耳朵或者称取20mg组织样本，将样本剪碎放在1.5ml的EP管中。
2、在每个EP管中加入微升的裂解液（我们实验室使用的是promega的试剂盒）将加入裂解液的组织放在55摄氏度的水浴箱中过夜（16—18h）裂解完全的标志是组织完全溶解。
3、第二天振荡每一个EP管，混匀后再离心，转速rmp时间是3分钟，取上清分离毛发，将取的上清加到柱型管中（有滤网的小柱型管，柱型管套装在1.5的EP管中）。
4、在每个柱型管中加入微升的WizardSVlysisBuffer，此裂解液需要提前水浴30min，55摄氏度。
5、离心3min转速rpm，倒掉滤液。
6、在每个管中加入微升washsolution离心1min转速rpm，这一步骤重复四遍，每一次都弃去管底的废液。
7、4次洗完之后，什么都不加再离心一次，1min转速rmp。
8、离心之后取出，放入到新的EP管中，每一个EP管中加入50微升Nuclease-free-water（无核酸酶水）需要提前水浴30min中55摄氏度。加的过程中要充分覆盖管底，静置2min，离心2min，保留EP管中的液体，此步骤重复两次。（如果要搁置需要保存在-20冰箱中）。
自此DNA已经提取完成。
显影
1、将获得的液体加入PCR混合液中，凝胶电泳，鉴定基因型。
PCR混合液的配制方法ddH2O9.5微升，Taq12.5微升，上游引物0.5微升，下游引物0.5微升。每一个EP管中的总量是24微升，提取的DNA只加1微升。
2、PCR扩增：将样品放入PCR仪扩增。
3、制胶——1%的胶。
小胶：琼脂糖0.25g+25mlTEB1%
中胶：琼脂糖0.5g+50mlTEB1%
大胶：琼脂糖1g+mlTEB1%
4、将琼脂糖加入TEB溶液后微波炉加热3min，冷却后加入核酸染料EBC，倒入制胶器制胶，30min后取出胶放入电泳槽中，黑线朝向正极。
5、加样，加Maker。
6、电泳。
7、显影。
个人经验
1、提取DNA的第一步中建议用小鼠的尾巴，优选小鼠尾巴，减轻动物疼痛且便于操作，在标记过程中每一个EP管要标号无论盖子顶部还是管壁，都要做标记，因为要在水浴箱中进行裂解。
2、在配裂解液的过程中，一般要多配出2份的量，因为在加样的过程中会有液体遗失，以防万一试剂缺如多配制2份。
3、在制备pcr混合液的时候无论是上游还是下游引物总量都不能过多，否则显影的时候会出现引物二聚体，出现重影。
4、加入核酸染料的量是3到5微升。
5、加入的maker和样品的量建议是5微升。
6、电泳的电压建议v，时间是45min。
7、使用离心机的时候要注意用常温的离心机，非4度，因为无论是裂解液还是无核酸酶水都是经过水浴箱55度温浴过的，所以，用常温的离心机即可。
